熒光標(biāo)記外泌體

外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。外泌體標(biāo)記或示蹤技術(shù)：對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或活體示蹤。

將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中，與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的功能變化，如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等；或者將外泌體注射入動物模型中，觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。

制備熒光標(biāo)記外泌體的步驟如下∶

1.取200 ug/ml的C5-馬來酰亞-Alexa488(綠色熒光）或C5-馬來酰亞-Alexa633(紅色熒光)2.5 ul，加入提取好的含60- 100 ug蛋白質(zhì)的30ul外泌體樣品中，以PBS補(bǔ)足至50ul ,不攪拌的情況下于暗室中室溫孵育60分鐘。

⒉.在孵育時將exosome spin columns ( Invitrogen )試劑盒按照說明書準(zhǔn)備好并將粉末樹脂于室溫下水合15-30分鐘。

3.將裝有柱子的收集管于離心機(jī)水平轉(zhuǎn)子中以750x g離心2分鐘，棄收集管，向樹脂中加入熒光染料孵育后的外泌體

4.將柱子置于1.5ml微量離心管750x g離心3分鐘，多余的染料會被樹脂吸附

5.熒光標(biāo)記后的外泌體緩慢加入1000ul不含酚紅的DMEM，于0.22um過濾膜過濾后。分裝并儲存于負(fù)80度備用。

人源肝癌細(xì)胞HepG2外泌體

胰腺β細(xì)胞外泌體

HPV陽性頭頸部鱗狀細(xì)胞癌外泌體

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體

小膠質(zhì)細(xì)胞外泌體

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞( BM-MSC）來源的外泌體

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體

鈣化血管平滑肌細(xì)胞(CVSMC)分離的外泌體

心肌梗死血清中的心腎外泌體

外泌體miR-20b-5p

外泌體miR-21

膀胱癌細(xì)胞分泌的外泌體

外泌體LNMAT2

人真皮成纖維細(xì)胞分泌的外泌體

CAR-T細(xì)胞分泌的外泌體

心臟祖細(xì)胞(CPC)來源的外泌體

葉酸-外泌體

膠質(zhì)瘤衍生的外泌體(GDEs )

外周循環(huán)外泌體miR-155

宮頸癌細(xì)胞分泌的外泌體miR-221-3p

M2型小膠質(zhì)細(xì)胞衍生的外泌體(M2-EXO )

活化肝星狀細(xì)胞分泌外泌體

間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體

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