WB實(shí)驗(yàn)原理，WB實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果分析，本視頻為直播回放視頻，每周六實(shí)驗(yàn)講座，周
2023-06-13 16:27 作者:caocaodala | 我要投稿
WB實(shí)驗(yàn)
作用：
1、定性（是什么蛋白）
2、半定量（相對(duì)定量，樣本間量的比較）
原理：
采用聚丙烯酰氨（PAGE）凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。
經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上（轉(zhuǎn)膜），固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)作為抗原，與相應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶（或同位素）標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色（或放射自顯影）以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。——1、抗原-抗體特異性結(jié)合
2、酶標(biāo)記的二抗與底物反應(yīng)顯色
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09:40
?Maker：像尺子一樣，衡量蛋白的分子量大小，出現(xiàn)顯影可以判斷目的蛋白表達(dá)了。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、收集蛋白樣品（組織或細(xì)胞）
2、電泳（PAGE）
3、轉(zhuǎn)膜
4、封閉：用脫脂奶粉結(jié)合膜上結(jié)合位點(diǎn)。便于一抗二抗孵育。
5、一抗孵育
6、二抗孵育
7、蛋白檢測(cè)
條帶分析：
ImageJ軟件分析進(jìn)行定量
WB的實(shí)驗(yàn)樣本前處理、保存、運(yùn)輸：
標(biāo)簽：
