qPCR是一種簡(jiǎn)單的、高通量的測(cè)定純化病毒樣本中腺相關(guān)病毒顆粒數(shù)的方法。每個(gè)模板的Ct值與該模板起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，利用已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。

1.去除游離的DNA分子

將病毒原液稀釋10倍，以保證樣品中的DNA充分溶解，按照下述體系在37℃孵育30min，去除游離的DNA分子，之后95℃加熱5min，使DNA酶失活。

?組成成分? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??? ? ? ???體積

超純水（DNase & RNase Free）? ? ? ? ? ? ?4μl

DNA酶? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ??1μl

10×DNA酶 Buffer? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1μl

病毒稀釋液? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?4μl

Total? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??10μl

2.去除病毒外殼蛋白

向上述體系中加入蛋白酶，37℃孵育30min，再加入超純水稀釋至總體積40μL，之后95℃加熱5min，使蛋白酶失活。然后離心，取上清液用于qPCR檢測(cè)。

3.?qPCR和數(shù)據(jù)計(jì)算

取上清液稀釋10倍后進(jìn)行qPCR檢測(cè)（至此已經(jīng)將腺相關(guān)病毒原液稀釋1000倍）。

病毒顆粒數(shù)（VP/mL）=標(biāo)準(zhǔn)曲線的對(duì)照值*1000（稀釋倍數(shù)）。