喵喵 | 3-5 基因工程題型專題（一）

1??限制酶基礎題型

習題1

下圖是3種限制酶對DNA分子的識別序列和酶切位點示意圖。

限制酶1 一↓ GATC一 限制酶2一CCG ↓ CGG— 限制酶3 —G ↓ GATCC一下列相關敘述錯誤的是

A. 不同的限制酶有不同的識別序列和切割位點，體現(xiàn)了酶的專一性

B. 根據(jù)識別序列的長度推測，在人類基因組中限制酶1的位點最少【長度越少，切割位點越多】

C. 限制酶1和酶3剪切DNA形成的黏性末端相同

D. 限制酶2剪切DNA會形成平末端

習題2

限制酶可識別并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下圖為四種限制酶BamH l 、EcoR l 、HindⅢ及Bgl ll的識別序列及每一種限制酶的特定切割部位。

其中哪兩種限制酶切割出來的DNA片段粘性末端可以互補結合

A. BamHⅠ和EcoR l

B. BamHⅠ和HindⅢ

C. BamH l和Bgl ll?

D. EcoR I和HindⅢ

習題3

下列黏性末端，用DNA連接酶能連接在一起的是

A. ①和④

B. ②和③

C. ①和③

D. ②和④?

【提問】

1. 不同酶是否可以切出相同黏性末端?

可以

2. 想把目的基因從DNA切下來，切幾刀？切開質(zhì)粒至少需要切幾刀？

目的基因至少切2刀，質(zhì)粒至少切1刀（最好2刀用雙酶切）

3. 線性DNA被同種酶切割形成5個片段，則該DNA上有幾個該酶的酶切位點？

切4刀

習題4

基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是：—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。根據(jù)圖示，判斷下列操作正確的是

A. 目的基因用限制酶Ⅰ切割，質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割

B. 目的基因用限制酶Ⅱ切割，質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割?

C. 目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割

D. 目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割

習題5

某線性DNA分子含有5000個堿基對（bp），先用限制酶a切割，再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的識別序列和切割位點如圖所示。下列敘述正確的是

A. a酶與b酶切斷的化學鍵并不相同【都是磷酸二酯鍵】

B. 不同的限制酶a與b識別的序列不同，因此切出的末端不同【相同，都是GATC】

C. 在該DNA分子上a酶與b酶的切割位點分別有3個和2個【畫圖】

D. 基因工程中的限制酶主要是從酵母菌等真核生物中分離純化得到【原核生物】

2??限制酶選取題型

如何選限制酶?

①能把目的基因切下來，但不能切斷目的基因

②與運載體有相同的黏性末端或平末端

③不能讓目的基因和質(zhì)粒自連

④插在啟動子和終止子之間，且正向連接

習題6

下圖甲、乙、丙分別是目的基因、質(zhì)粒載體、重組DNA（重組質(zhì)粒）的三個示意圖，限制酶有Bgl II，EcoRⅠ和Sau3A l。要獲得理想的可表達目的基因的重組DNA，最佳的限制酶組合方式是

A. 用EcoR l切割目的基因和質(zhì)粒載體

B. 用Bgl Ⅱ和EcoR l切割目的基因和質(zhì)粒載體

C. 用Bgl Ⅱ和Sau3AⅠ切割目的基因和質(zhì)粒載體

D. 用EcoR I和Sau3A Ⅰ切割目的基因和質(zhì)粒載體?【盡可能靠近】

習題7

表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1，圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。下列說法正確的是

A. 一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma l切割前后，分別含有0，1個游離的磷酸基團【線性的有2個磷酸基團】

B. 同時使用限制酶Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ切割圖中的質(zhì)粒和外源DNA，可防止其自身環(huán)化?

C. 構建cDNA文庫時，需要利用逆轉錄酶，不需要使用限制酶【cDNA是mRNA逆轉錄形成，還需要用限制酶】

D. 因為限制酶具有特異性，所以不同的限制酶酶切DNA后一定形成不同的黏性末端【還有同尾酶】

3??啟動子題型

如何選啟動子？

①若把人基因?qū)氪竽c桿菌，選擇的啟動子為，大腸桿菌啟動子還是人的啟動子?

• 大腸桿菌

②若想讓目的基因只在特定組織中表達：強啟動子還是組織特異性啟動子?

• 組織特定性啟動子

習題8

植物學家在培育抗蟲棉時，對目的基因作了適當?shù)男揎?，使得目的基因在棉花植株?strong>整個生長發(fā)育期都能表達，以防止害蟲侵害，這種對目的基因所作的修飾發(fā)生在

A. 終止子

B. 標記基因

C. 結構基因

D. 啟動子?【能啟動表達就是先啟動轉錄】

習題9

環(huán)境雌激素（EEs）影響動物和人類的性腺發(fā)育，斑馬魚在EEs的誘導下會表達出卵黃蛋白原（vtg）。已知綠色熒光蛋白（GFP）基因能使斑馬魚發(fā)光，欲獲得能檢測水中是否含有EEs的轉基因斑馬魚，下列操作合理的是

A. 將EEs基因的啟動子與GFP基因重組

B. 將vtg基因的啟動子與GFP基因重組?

C. 將GFP基因的啟動子與GFP基因重組

D. 將GFP基因的啟動子與vtg基因重組

4??DNA的粗提取及鑒定實驗

1. 實驗原理

（1）DNA的粗提取原理：

①DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，初步分離DNA與蛋白質(zhì)。

②DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。

（2）DNA的鑒定原理:在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色。

2. 材料選擇

富含DNA的材料，如新鮮洋蔥（也可選擇香蕉、菠菜、菜花和豬肝等）。

【提問】

是否可選擇豬血紅細胞提取DNA？

是否可選擇雞血紅細胞提取DNA?

【提問】

1. 研磨液中添加洗滌劑和NaCl的作用？

• 洗滌劑：是瓦解細胞膜和核膜
• 食鹽：溶解DNA

2. 析出DNA時必須用“冷酒精”。預冷的酒精具有優(yōu)點?

（1）抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解；

（2）降低分子運動，易于形成沉淀析出;

（3）低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷。

【鑒定DNA】

習題10

下列關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是

A. 羊的成熟紅細胞可作為提取DNA的材料【哺乳動物成熟紅細胞，沒有細胞核】

B. 提取植物細胞的DNA時，需要加入一定量的洗滌劑和食鹽

C. 預冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解

D. 在沸水浴條件下，DNA與二苯胺反應呈現(xiàn)藍色

習題11

下表關于DNA粗提取與鑒定實驗的表述，不正確的是

A. A

B. B

C. C【冷酒精是溶解蛋白質(zhì)的】

D. D

習題12

如圖是”DNA粗提取與鑒定”實驗中的兩個操作步驟示意圖，下列敘述正確的是

A. 圖1中溶液a 是 NaCl 溶液?

B. 圖1所示操作的原理是DNA能溶于酒精，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不溶【蛋白質(zhì)溶于酒精，DNA不溶】

C. 圖2試管1的作用是證明2 mol ·L?1NaCl溶液遇二苯胺出現(xiàn)藍色【NaCl跟二苯胺不出現(xiàn)顏色】

D. 圖2所示實驗操作中有一處錯誤，可能導致試管②中藍色變化不明顯?【DNA溶液需要加入NaCl】