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兼具逆轉(zhuǎn)錄和聚合酶兩種活性的酶, 您見過嗎 ?

2022-10-27 16:17 作者:分子科普小feng子  | 我要投稿

大家有沒有在火車站等核酸報告的經(jīng)歷?火車要開了, 報告沒有出來, 傻傻等待核酸結(jié)果中!

抓狂的內(nèi)心呼喊: 核酸報告怎么還沒有出來???


Medix 推出 Volcano3G??系列產(chǎn)品, 以新冠為例,可以把常規(guī)2小時的檢測時間可以縮短為半個小時!

心動了嗎? 心動的話, 咱往下看詳細內(nèi)容, 我們言歸正傳,慢慢寫:

對于RNA樣本檢測,常規(guī)傳統(tǒng)的一步法檢測,需要依賴于單獨的逆轉(zhuǎn)錄酶先進行反轉(zhuǎn)錄、完成cDNA合成后,再啟動DNA聚合酶活性、進入循環(huán)擴增環(huán)節(jié),整個反應過程耗時相對較長,需要雙酶協(xié)同工作,對于體系優(yōu)化具有一定挑戰(zhàn)。

Medix Biochemica重磅推出雙功能重組酶預混試劑——Volcano3G?,具有高達95℃的熱穩(wěn)定性,兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性,實現(xiàn)零步RT-PCR、粗樣本直擴檢測。

兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性

Volcano3G?預混試劑中,采用的工程化重組Taq DNA聚合酶,兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性,可同時實現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成和DNA擴增,真正實現(xiàn)零步法RT-PCR檢測。

Volcano3G?中使用的兼具逆轉(zhuǎn)錄酶活性的雙功能 Taq DNA聚合酶,適用于RNA和/或DNA模板的檢測(藍色實線 、黃色實線? ),而普通Taq DNA聚合酶,僅適用于針對DNA模板的擴增檢測(黃色虛線),不能進行RNA反轉(zhuǎn)錄(藍色虛線)。

引用文獻:Johannes W. P. Kuiper, Timo Baade, et al. Detection of SARS-CoV-2 from raw patient samples by coupled high temperature reverse transcription and amplification. PLoS One. 2020 Nov 2;15(11):e0241740.

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零步法RT-PCR檢測,縮短反應時間,支持粗樣本直擴

Volcano3G?基于適配體修飾熱啟動酶配方,支持在高溫條件下即時啟動循環(huán),無需單獨的樣本提取步驟,實現(xiàn)粗樣本直接擴增,并且在雙功能工程化酶的作用下,極大程度縮短檢測時間。

Volcano3G?快速零步法 RT-PCR,相較于傳統(tǒng)一步 RT-PCR,節(jié)省了15+5 min單獨逆轉(zhuǎn)錄和預變性過程,極大程度縮短了檢測時間。

高達95℃真正耐高溫的雙功能酶

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Volcano3G?熱穩(wěn)定性高達95℃。在45~95℃溫度范圍依然保持高效的RNA逆轉(zhuǎn)錄和DNA擴增效率。較高的逆轉(zhuǎn)錄溫度有助于減少靶基因中形成的RNA二級結(jié)構(gòu),提高引物特異性,從而提高擴增效率。

實驗組:Volcano3G?、供應商B和供應商C試劑,于45~95℃加熱15min后,用于SCV2為樣本的RT-qPCR檢測,得到Cq(實驗組)。

對照組:以SCV2為樣本,分別使用Volcano3G?、供應商B和供應商C試劑進行擴增檢測,得到Cq(對照組)。

根據(jù)Cq(對照組)- Cq(實驗組)得到的ΔCq值,可以看出供應商B和供應商C(綠色、橙色)經(jīng)過高溫處理后,增加的ΔCq表明在恒定模板量前提下發(fā)生延遲或沒有擴增,而Volcano3G?(黑色)經(jīng)過高溫后依然保持高效酶活性,具有更優(yōu)的熱穩(wěn)定性。

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