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細胞毒性檢測的原理及方法—源井生物

2021-05-12 11:52 作者:源井生物  | 我要投稿

毒性檢測

細胞毒性(cell cytotoxicity)是由細胞或化學(xué)物質(zhì)引起的單純細胞殺傷事件,不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。有時需要進行特定物質(zhì)細胞毒性的檢測,比如藥物篩選。

技術(shù)原理

正常細胞代謝旺盛,其線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶,可將四唑鹽類物質(zhì)(如 MTT、XTT、WST-1和WST-8等 )還原為紫色結(jié)晶狀物質(zhì),沉積在細胞周圍,然后通過酶標(biāo)儀讀取OD值,從而檢測到細胞增值狀態(tài)。 Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)是一種基于WST-8(Water Soluble Tetrazolium-8)而廣泛應(yīng)用于細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒,可用于簡便而準確的細胞毒性分析。 其基本原理為:WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞毒性分析。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

結(jié)果示例



參考文獻 Liu, Qing-Hua et al. “Reduced expression of annexin A1 promotes gemcitabine and 5-fluorouracil drug resistance of human pancreatic cancer.” Investigational new drugs vol. 38,2 (2020): 350-359. doi:10.1007/s10637-019-00785-5

服務(wù)周期及結(jié)果

檢測細胞毒性的其他方法


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