包被液（0.05M pH9.6碳酸鹽緩沖液）：取NaHCO3 2.93g，Na2CO3 1.59g于900mL ddH2O中，攪拌至完全溶解，調(diào)pH值至9.6，定容至1L 。

洗滌液（PBST）：向1×PBS中加入0.5%的Tween-20。

封閉液：含5%（W/V）脫脂奶粉的PBST。

詳細(xì)步驟

1）將商品化的重組 蛋白（1 μg/mL）包被于 96 孔 ELISA 板中，4 ℃

條件過(guò)夜；

2）PBST 清洗 ELISA 板 3 次后，每孔加入 200 μL 的封閉液進(jìn)行封閉，于 37 ℃

條件孵育 2 h 后，用 PBST 洗板 3 次；

3）每孔加入 100 μL 梯度稀釋的血清樣品，于 37 ℃條件培養(yǎng) 2 h 后，用 PBST

洗板 5 次；

4）于各孔中加入 100 μL 的 HRP 標(biāo)記的鼠二抗稀釋液，在 37 ℃條件下孵育 45

min，隨后用 PBST 洗板 5 次；

5）于各孔中加入 100 μLTMB，隨后待孔內(nèi)出現(xiàn)較深藍(lán)色后加入 50 μL 終止液。

將板置于酶標(biāo)儀中記錄 450 nm 處的 OD 值。