細(xì)胞凋亡是細(xì)胞對(duì)環(huán)境的生理和病理刺激信號(hào)、環(huán)境條件的變化或?qū)孟⑿該p傷的有序變化作出反應(yīng)的一種死亡過(guò)程。細(xì)胞凋亡涉及DNA斷裂、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、線粒體膜電位和蛋白表達(dá)等一系列形態(tài)學(xué)和分子變化。Biogradetech開(kāi)發(fā)了一系列用于細(xì)胞凋亡多維分析的試劑盒。

類別?檢測(cè)方法

形態(tài)學(xué)?顯微鏡觀察

細(xì)胞功能?線粒體膜電位檢測(cè)，膜聯(lián)蛋白V/PI

生化標(biāo)記?凋亡分子標(biāo)記檢測(cè)，DNA損傷檢測(cè)

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英文名稱?中文名稱?規(guī)格?貨號(hào)

One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)?一步法，TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（綠色熒光）?50T?D-AKK2010

One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Red Fluorescence)?一步法，TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）?50T?D-AKK2011

Annexin V-AF 488/PI Apoptosis Detection kit?Annexin V-AF 488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒?50T?D-AKE0002

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接下來(lái)一起看看艾美捷Annexin V-AF 488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒吧~

AnnexinV-AF488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一種快速方便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。在所提供的結(jié)合緩沖液中用膜聯(lián)蛋白V-AF 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行染色后，早期凋亡細(xì)胞顯示細(xì)胞膜的綠色熒光，死細(xì)胞顯示細(xì)胞核的紅色熒光和細(xì)胞膜的紅色熒光，活細(xì)胞顯示很少或沒(méi)有熒光。此外，為了解決細(xì)胞凋亡檢測(cè)和結(jié)果的不標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題，該試劑盒還提供了一種獲得專利的細(xì)胞凋亡陽(yáng)性參考物質(zhì)。檢測(cè)可以通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡進(jìn)行分析。

Cat #: D-AKE0002

Size: 50T

Storage: Stored at -20°C for 12 months, protected from light

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Annexin V-AF 488/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒供應(yīng)材料和儲(chǔ)存條件：

化驗(yàn)程序：

I細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)陽(yáng)性

1.對(duì)于要誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的培養(yǎng)細(xì)胞，將凋亡誘導(dǎo)劑A或凋亡誘導(dǎo)劑B按1:1000-1:3000的體積比加入培養(yǎng)基中（凋亡誘導(dǎo)器A和凋亡誘導(dǎo)器B可以一起珠狀加入培養(yǎng)基）。

2.在4、8、12、16或24小時(shí)后觀察到細(xì)胞凋亡。大多數(shù)情況下，在16-24小時(shí)后，在光學(xué)顯微鏡下可以看到細(xì)胞形態(tài)的明顯變化，這可以用來(lái)觀察細(xì)胞凋亡染色（建議調(diào)整不同細(xì)胞的誘導(dǎo)時(shí)間和濃度）。

l膜聯(lián)蛋白V-AF 488/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡

A.流式細(xì)胞術(shù)定量

1.使用所需的方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過(guò)在沒(méi)有誘導(dǎo)劑的情況下孵育細(xì)胞來(lái)制備陰性對(duì)照。

2.離心（4°C，300g，5min）收集1-2×105個(gè)細(xì)胞，用冰冷的PBS洗滌兩次。

注：對(duì)于粘附細(xì)胞，先用胰蛋白酶（不含EDTA）消化細(xì)胞，然后離心。胰蛋白酶化的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，因?yàn)橐鹊鞍酌笗?huì)破壞膜的結(jié)構(gòu)。

3.將細(xì)胞重新懸浮于100μL 1xAnnexin V結(jié)合緩沖液中。

4.向每100μL細(xì)胞懸浮液中加入5μL膜聯(lián)蛋白V-AbFluor’M 488和2μL PI，輕輕混合。

5.將細(xì)胞在室溫下在黑暗中培養(yǎng)15分鐘。

6.培養(yǎng)期結(jié)束后，加入400μL 1xAnnexin V結(jié)合緩沖液，輕輕混合，并將樣品置于冰上。在染色后30分鐘內(nèi)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞。使用491 nm和535 nm激發(fā)并測(cè)量熒光

517nm（FITC通道）和617nm（PE或PI通道）附近的發(fā)射。

B.熒光顯微鏡檢測(cè)

1.對(duì)于懸浮細(xì)胞

1） 按照流式細(xì)胞儀的方案從步驟A.1到步驟A.6。

2） 將步驟A.6中的細(xì)胞懸浮液放在載玻片上。用玻璃蓋玻片蓋住細(xì)胞。盡快使用合適的過(guò)濾器通過(guò)熒光顯微鏡分析細(xì)胞（Annexin V-AbFluor’M 488可以使用FITC設(shè)置成像，而Pl可以使用Cy°3或Texas Redo設(shè)置成像）。

2.對(duì)于粘附細(xì)胞，建議的方案如下：

1） 在蓋玻片或室玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。

2） 使用所需方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。通過(guò)在沒(méi)有誘導(dǎo)劑的情況下孵育細(xì)胞來(lái)制備陰性對(duì)照。

3） 用PBS洗滌細(xì)胞兩次，預(yù)熱或在室溫下。

4） 制備工作溶液：向每100μL 1xAnnexin V結(jié)合緩沖液中加入5μL Annexin V-AbFluor“M 488和2μL PI，輕輕混合。

5） 向細(xì)胞中加入適量的工作溶液，在室溫下在黑暗中孵育15分鐘（可以在冰上進(jìn)行孵育以減緩細(xì)胞凋亡過(guò)程，但孵育時(shí)間至少延長(zhǎng)到30分鐘）。

6） 用1xAn-nexin V結(jié)合緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。

注意：在此步驟中，不要使用PBS清洗細(xì)胞。

7） 用一滴1xAnnexin V結(jié)合緩沖液將蓋玻片固定在載玻片上。對(duì)于載玻片上的細(xì)胞，添加足夠的

1xAnnexin V結(jié)合緩沖液，完全覆蓋細(xì)胞。

注：也可以使用抗熒光猝滅劑。

8） 盡快使用合適的過(guò)濾器通過(guò)熒光顯微鏡分析細(xì)胞。

免責(zé)聲明

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僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。